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實驗目的
多(duo)(duo)肽疫苗(miao)(miao)是(shi)按照病(bing)原(yuan)(yuan)體抗原(yuan)(yuan)基(ji)因中已知或(huo)預測的(de)(de)(de)某段抗原(yuan)(yuan)表(biao)位的(de)(de)(de)氨(an)基(ji)酸序列,通過化學(xue)合成(cheng)技術(shu)制備(bei)的(de)(de)(de)疫苗(miao)(miao)。基(ji)于(yu)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)遞送(song)系統已被確(que)立為誘導體液和細胞(bao)免疫反(fan)應的(de)(de)(de)強大遞送(song)系統,目前應用最為廣泛的(de)(de)(de)是(shi)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體和脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)納米(mi)粒(lipid nanoparticle, LNP)。脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體可以包裹水溶(rong)性(xing)和脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)溶(rong)性(xing)藥物,增強抗原(yuan)(yuan)蛋(dan)白的(de)(de)(de)穩定性(xing),并通過儲存效(xiao)應促進(jin)疫苗(miao)(miao)成(cheng)分(fen)的(de)(de)(de)逐漸釋(shi)放,更適(shi)合遞送(song)親(qin)水性(xing)多(duo)(duo)肽分(fen)子,但(dan)仍(reng)存在穩定性(xing)較差(cha),包封(feng)率(lv)較低的(de)(de)(de)問題。本研究(jiu)選擇脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體作(zuo)為免疫遞送(song)系統構(gou)建多(duo)(duo)肽疫苗(miao)(miao),設計構(gou)建了(le)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體的(de)(de)(de)處方工藝,并通過單因素實驗對(dui)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體制備(bei)的(de)(de)(de)處方工藝進(jin)行(xing)優化。
實驗方法
超聲功率的選擇
以優化后的膜材比制(zhi)備脂質體,在保持其他因素不改(gai)變的情況(kuang)下,考(kao)慮到超聲(sheng)功率(lv)過大會導(dao)致(zhi)大量(liang)發熱,依(yi)次(ci)改(gai)變超聲(sheng)功率(lv)(30、40、50、60 W)(儀器(qi):超聲(sheng)波(bo)細胞粉碎機),繼續進行4組實驗,分(fen)(fen)別測定各組脂質體粒(li)徑分(fen)(fen)布和(he)多分(fen)(fen)散系數。
超聲次數/時間的選擇
以(yi)優化后的膜材比、超聲(sheng)功率(lv)制備脂質體(ti),在控(kong)制其他因素不改變(bian)的情(qing)況下,依次改變(bian)超聲(sheng)次數(30,40,50,60),繼續進行4組(zu)實驗,分(fen)別測定各組(zu)脂質體(ti)粒徑分(fen)布和多分(fen)散系數。
實驗結果
超聲功率的篩選結果
由表1可知,當(dang)(dang)超聲功率為(wei)(wei)30 W、平(ping)均粒(li)徑為(wei)(wei)162.2 nm、PDI為(wei)(wei)18.3%時(shi),所制備的脂質體最好;當(dang)(dang)超聲功率為(wei)(wei)60 W時(shi),功率較大導致(zhi)溶(rong)液溫度明顯升高,脂質體的粒(li)徑偏大,PDI為(wei)(wei)0.351,分(fen)散程(cheng)度也明顯變大,不適合作為(wei)(wei)制備條件。
超聲次數的篩選結果
由表2可知,當超聲次(ci)數(shu)(shu)為40次(ci)時(shi),所得脂質(zhi)(zhi)體(ti)物理性質(zhi)(zhi)最優。實驗過(guo)程(cheng)中發現,當超聲次(ci)數(shu)(shu)為60次(ci)時(shi),置于超聲破碎機(ji)內的(de)樣品(pin)溶液溫度(du)較高(gao),從表2結果也可以看出,過(guo)高(gao)的(de)溫度(du)導致所制(zhi)備的(de)脂質(zhi)(zhi)體(ti)平均粒徑和(he)PDI升高(gao),提示在脂質(zhi)(zhi)體(ti)制(zhi)備過(guo)程(cheng)中要考慮溫度(du)的(de)影響。
實驗討論
脂(zhi)質(zhi)體(ti)(ti)的(de)理化性質(zhi)是(shi)決定脂(zhi)質(zhi)體(ti)(ti)發揮作(zuo)用效果的(de)重要(yao)影響(xiang)因素(su),粒徑(jing)及其(qi)(qi)分布是(shi)判斷(duan)脂(zhi)質(zhi)體(ti)(ti)是(shi)否合格(ge)的(de)重要(yao)指標。研究表明,納米(mi)顆(ke)粒(<200 nm)更容易通過淋(lin)巴引(yin)流進(jin)入淋(lin)巴結(jie),并促進(jin)抗原(yuan)提呈細(xi)胞的(de)吸(xi)收,使其(qi)(qi)更適合傳遞(di)分子佐劑(ji)和抗原(yuan)。單因素(su)實驗得(de)到(dao)的(de)最優的(de)制備條件為:膜材比(bi)5∶1、超聲功(gong)率30 W、超聲次數40次、高壓均質(zhi)時間6 min,使脂(zhi)質(zhi)體(ti)(ti)的(de)平均粒徑(jing)從329.7 nm減小至132.0 nm,對(dui)此制備流程進(jin)行了驗證,其(qi)(qi)結(jie)果與預期相(xiang)符,且(qie)PDI均在30%以下,說(shuo)明脂(zhi)質(zhi)體(ti)(ti)粒徑(jing)分布比(bi)較(jiao)均勻(yun)。