產品說明
SCIENTZ-2CS基(ji)(ji)因導(dao)入儀由(you)儀器主機、基(ji)(ji)因導(dao)入杯及專用連接線等組成。主要是(shi)利用電轉(zhuan)化來將DNA轉(zhuan)入感受(shou)態細(xi)胞(bao)、動植物(wu)細(xi)胞(bao)、酵母細(xi)胞(bao)中。與其它方法(fa)相比,基(ji)(ji)因導(dao)入儀法(fa)具(ju)有高重復性(xing),高效(xiao)率、操(cao)作(zuo)簡易、可(ke)定量控制等優點(dian),同時,電轉(zhuan)沒有基(ji)(ji)因毒性(xing),已經成為不可(ke)缺少的(de)分子生物(wu)學基(ji)(ji)本技術。
工作原理
細胞(bao)電(dian)轉染(電(dian)轉),也(ye)叫細胞(bao)電(dian)穿孔 (electroporation),是(shi)把外源大分(fen)子物質DNA、RNA、siRNA、蛋白(bai)質等(deng)以及一些小分(fen)子導入細胞(bao)膜內部的(de)重要方法。
在(zai)瞬間強大電(dian)(dian)(dian)場(chang)的(de)(de)(de)作用(yong)下,溶(rong)液中細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)(de)(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)膜(mo)(mo)具有了一定(ding)的(de)(de)(de)通透性,帶電(dian)(dian)(dian)的(de)(de)(de)外(wai)源物質以類(lei)似電(dian)(dian)(dian)泳(yong)的(de)(de)(de)方(fang)式進入細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)膜(mo)(mo)。由于(yu)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)膜(mo)(mo)磷脂(zhi)雙分(fen)子層(ceng)的(de)(de)(de)電(dian)(dian)(dian)阻很(hen)大,細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)外(wai)部電(dian)(dian)(dian)流場(chang)產生的(de)(de)(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)兩極電(dian)(dian)(dian)壓(ya)都被細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)膜(mo)(mo)承(cheng)受,細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)質內分(fen)到(dao)的(de)(de)(de)電(dian)(dian)(dian)壓(ya)可(ke)以忽略不計,細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)質內部幾乎沒有電(dian)(dian)(dian)流,因此(ci)也決(jue)定(ding)了正常(chang)范圍內的(de)(de)(de)電(dian)(dian)(dian)轉過程中細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)毒性很(hen)小。電(dian)(dian)(dian)場(chang)使DNA等物質進入細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)膜(mo)(mo)后只能(neng)停止在(zai)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)膜(mo)(mo)附近,隨后細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)本身的(de)(de)(de)機制可(ke)以允許這些物質到(dao)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)核等處。
由于電(dian)轉(zhuan)(zhuan)技術依靠的是(shi)物理方法,細胞表面的分子特性對電(dian)轉(zhuan)(zhuan)影響(xiang)比(bi)較小。相比(bi)化(hua)學(xue)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)方法和病(bing)毒載(zai)體轉(zhuan)(zhuan)染(ran)方法,電(dian)轉(zhuan)(zhuan)可(ke)以用在所有的細胞種類上,而且容易定量(liang)控制。
細(xi)胞(bao)電轉(zhuan)電場圖
1 細胞膜近(jin)似絕緣(yuan)體,細胞附(fu)近(jin)電轉液(ye)中電流扭曲。 2 在(zai)串聯電(dian)路中電(dian)阻越大分到電(dian)壓越大,細胞(bao)兩(liang)端(duan)電(dian)壓基本(ben)都落(luo)在(zai)兩(liang)端(duan)細胞(bao)膜上。 3 只有一(yi)個細胞(bao)端面電轉有效。 4 細胞(bao)質內分到(dao)電壓很小,DNA電轉進入細胞(bao)膜后馬(ma)上停止,后續(xu)靠細胞(bao)本身機制慢速擴散。 5 細胞核兩端電壓及其微小,微小的電壓又落在核膜上,核內部完全沒有電壓,電轉沒有基(ji)因毒性(xing)。 | |
應用領域
? 細菌、酵母(mu)及其(qi)他微(wei)生物的電(dian)轉化 | ? 導入藥物、蛋白(bai)、抗體等(deng)分子對細胞(bao)的結構和功能(neng)進行研究 | ? 細胞雜交、融合基因(yin)導(dao)入 |
? 導入標記(ji)基因起到標記(ji)、指示的作用 | ? 哺乳(ru)動物細胞的(de)轉染、植物組(zu)織(zhi)和(he)原(yuan)生(sheng)質體(ti)的(de)轉染 | |
產(chan)品特(te)點(dian)
? 效(xiao)率高 轉化時間短、轉化率高、重復性優異 | ? 智能儲存:可存儲實驗(yan)參數,方(fang)便用戶調取 |
? 控(kong)制精準(zhun) 采用微(wei)處理(li)器控制(zhi)的脈沖放電 | ? 外形美觀 整機一體化設計,顯示直觀,操作簡單 |
實驗舉例(li)
1、LI J等人基于高通量篩選分析p53–MDM2蛋白相互作用的小分子抑制劑的研究結果。[1]
| | 2、ZHANG S Y等人發現和鑒定一個獨特的G蛋白偶聯受體119激動劑的研究結果。[2] |
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1、LI J, ZHANG S, GAO L, et al. A cell-based high-throughput assay for the screening of small-molecule inhibitors of p53-MDM2 interaction [J]. Journal of biomolecular screening, 2011.
2、ZHANG S Y, LI J, XIE X. Discovery and characterization of novel small molecule agonists of G protein-coupled receptor 119 [J]. Acta pharmacologica Sinica, 2014.
不同菌種的(de)轉(zhuan)化率
備(bei)注:因各單位實驗(yan)條件不盡相同(tong),以(yi)上實驗(yan)參(can)數僅(jin)供參(can)考