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八戒:猴哥救我!
悟空:呆子,何事慌張!
八戒:猴哥你沒聽說嗎!非洲豬瘟來了,一個被傳染,一窩都遭殃啊!我聽說遼寧、黑龍江、吉林、江西、福建、四川好多兄弟都已經被撲殺了。
悟空:呆子!那還不離我遠點!
問題一、什么是非洲豬瘟?
非洲豬瘟(African Swine fever,ASF)是由非洲豬瘟病毒(African Swine fever virus,ASFV)感染家豬和各種野豬(不傳染人)引起一種急性、出血性、烈性傳染病。其特征是發病過程短,最急性和急性感染死亡率高達100%,且只能依靠實驗室監測確診。
2018年8月3日我國確診首例非洲豬瘟疫情。
問題二、目前在中國的傳染范圍?
自8月初我國首次發現非洲豬瘟以來,截至11月22日,全國有20個省份47個市(區、盟)發生73起家豬疫情、1起野豬疫情,累計撲殺生豬60萬頭。全國非洲豬瘟疫情呈現多點散發狀態,但在各地動物疾控部門的積極行動下,疫情開始趨于平穩,總體防控有效。
問題三、非洲豬瘟檢測的樣品處理方法介紹
一、非洲豬瘟樣品處理
1. 目的
規范ASFV樣品和實驗材料的處理程序,保證ASFV相關實驗的順序開展和實驗室的生物安全。
2. 適用范圍
適用于疑似ASFV臨床樣品的實驗前的處理
3. 程序
3.1實驗材料
ASF的易感動物,主要為家豬、野豬和蜱,通常采集的樣品為家豬、野豬的血液樣品、組織樣品以及蜱三類。田間采集的樣品通常需要經過簡單的預處理,才能進行后續的檢測、診斷工作。
血清:用于病毒核酸檢測、病毒抗原和抗體檢測。將采好的豬血的注射器或采血管在室溫下傾斜靜止2~4h(防止暴曬),或置于37℃溫箱內1h,待大部分血清析出后,取出血清,必要時經離心分離血清。(最低建議量5ml)。
抗凝全血:用于病毒核酸檢測和病毒抗原檢測。
采血前,在真空采血管或注射器內按比例加入抗凝劑。采集血液,輕輕上下顛倒,使血液與抗凝劑充分混勻,防止血液凝固的同時避免溶血。也可以將血液放入裝有玻璃珠的滅菌瓶內,震蕩脫落纖維蛋白。必要時,可加入雙抗以抑制血源性或采血過程中可能出現的細菌污染。
當血樣用于病毒核酸檢測時,一般不用肝素而選用EDTA作為抗凝劑。(最低建議量1mL)。
組織樣本:活體采集,采用扁桃體,用于臨床健康動物ASF監測。
尸體剖檢ASF發病動物或死亡動物經解剖取材,包括:ASFV靶器官的采集:脾臟、淋巴結、腎臟、扁桃體。
其他病變組織臟器的采集:采集具有明顯病變的肝臟、肺臟、心臟等組織器官,選取部位在病變和健康組織交界處。
腐敗動物尸體的樣品采集:剖檢取股骨,將附著的肌肉和韌帶等全部剔除,采集骨髓。最低建議量5克。
蜱的采集:蜱可進行核酸檢測、抗原檢測和蜱的形態學鑒定,查找豬圈的墻邊、墻縫、木質或瓦質的屋頂,或挖掘豬圈地面均可能找到蜱,也可查看豬表皮,采集蜱。
1-1樣品保存條件
樣品名稱 \ 溫度要求或條件 | 采集過程 | 運輸及檢測過程 | 長期保存 | |
血 液 | 抗凝血 | 冷藏 | 冷藏 | -70℃或者-196℃ |
血清 | 冷藏 | 冷藏 | -70℃或者-196℃ | |
肝血濾紙片 | 常溫 | 常溫 | - | |
濾紙 | 冷藏或常溫 | 冷藏或常溫 | 冷藏或常溫 | |
組 織 | 固定組織 | 常溫 | 常溫 | 常溫 |
組織觸片 | 常溫 | 常溫 | - | |
新鮮組織 | 冷藏 | 冷藏或常溫 | -70℃或者-196℃ | |
蜱蟲 | 活體 | 15℃~22℃ | 15℃~22℃ | 15℃~22℃(血飼)[9.19] |
固定 | 常溫 | 常溫 | 常溫 | |
速凍 | -70℃或者-196℃ | -70℃或者-196℃ | -70℃或者-196℃ |
注:用于病毒分離和病理學檢測的樣品禁止-20℃保存。
3.2實驗器材和試劑
臺式高速冷凍離心機、組織研磨儀、水浴鍋、計時器、冰箱和移液器等。
無菌的剪子、鑷子、鋼珠、2mLEP管、移液器吸頭(10μL,200μL、1000μL)等。
其他試劑和耗材主要包括:0.01mol/L PBS(PH7.2)、0.8%NaOH、75%酒精棉球等。
3.3樣品處理程序
3.3.1血清及全血樣品處理
取血清或全血樣品1mL于滅菌EP管里,保存備用
3.3.2組織樣品處理
適用于脾臟等組織樣品和蜱的處理。盡可能減少污染,每取一個組織塊或蜱,用火焰消毒剪鑷等取樣器械,組織塊應分別放入滅菌容器內并立即密封,做好標記,注意防止組織間相互污染。
3.3.2.1組織樣品的處理應在二級生物安全柜中進行,勿使液體濺到生物安全柜中。
3.3.2.2將0.1-0.2g組織塊放入2mLEP管中,用剪刀剪成碎塊,加1-2mL0.01mol/L PBS(PH7.2),再加入1-2粒滅菌鋼珠,密封后,表面消毒備用。剩余樣品放回容器內,重新密封,表面消毒后保存-70℃冰箱。
3.3.2.3組織樣品的破碎可以利用組織研磨儀在生物安全柜外操作,將樣品制成組織懸液。
重磅推薦使用Scientz-48L冷凍型高通量組織研磨器!
3.4病毒滅活
病毒的滅活處理應在二級生物安全柜中進行,將處理好的血清、全血或者研磨破碎后的組織樣品連同EP管放入60℃水浴中,放置30min滅活。
3.5使用后儀器處理
剪刀、鑷子等均應放入消毒缸進行消毒,放入鐵飯盒內,并裝入密封袋內進行高壓滅菌處理。裝有組織樣品保存液的容器和盛有組織塊的離心管應密封管口,表面消毒后放入密封袋中高壓滅菌。鋼珠、吸頭等廢棄物應用0.8%NaOH浸泡30分鐘消毒后,置密封袋內高壓滅菌。消毒殘液應裝入密封容器內高壓滅菌處理。
3.6注意事項
操作之前要確認生物安全柜和實驗室已進行了徹底的衛生消毒處理,防止樣品間交叉感染。
二、非洲豬瘟病毒的核酸檢測可用實時熒光PCR配套相應實際進行,具體操作步驟以儀器生產公司指南為準。
問題四、病毒殺滅和防控方式
非洲豬瘟病毒雖然在環境中比較穩定,但在豬肉烹煮處理過程中較易失活,70℃-75℃>加熱30分鐘以上,病毒就會被殺滅,也就是說我們日常烹飪過程中只要把豬肉熟透(包括最中間部位溫度至少達到70℃以上),即使有病毒也會很快失去感染力并喪失活性。
新芝生物Scientz-48L冷凍型高通量組織研磨器介紹
新芝生物推出的Scientz-48L冷凍型高通量組織研磨器具備以下特征:
1.應用場景多樣。可以對不同組織進行干磨、濕磨、混合以及均質化處理。
2.實驗效率高。能提高提取大通量樣品中核酸的效率和質量。
3.實驗過程安全。研磨過程采用封閉式一次性離心管,有效地避免了樣品交叉污染。
4.儀器穩定性好。對同一組織樣品可設定相同的研磨程序,從而獲得相同的研磨效率,提高了實驗的可重復性。
5.研磨效果好。產品采用高效研磨球進行研磨,相較于傳統研磨方式對樣品的研磨更為均勻、充分。
目前,新芝生物Scientz-48L冷凍型高通量組織研磨器已助力沈陽、大連、朝陽、本溪、鞍山、錦州、葫蘆島等多地動物疾控中心用于非洲豬瘟檢測實驗的樣品前處理。
Scientz-48L冷凍型高通量組織研磨器高效、穩定、安全的儀器特性很好地解決了檢測過程中檢測樣品數量多、實驗一致性難以控制等問題,得到了廣大用戶的一致好評。
產品用途
1.適用于各種植物組織包括根、莖、葉、花、果、種子等樣品的研磨破碎;
2.適用于各種動物組織包括大腦、心臟、肺、胃、肝臟、胸腺、腎臟、腸、淋巴結、肌肉、骨骼等樣品的研磨破碎;
3.適用于真菌、細菌等樣品的研磨破碎;
4.適用于食品、藥品成分分析檢測的研磨破碎;
5.適用于易揮發樣品包括煤炭、油頁巖、蠟制品等樣品的研磨破碎;
6.適用于塑料、聚合物包括PE、PS、紡織品、樹脂等樣品的研磨破碎。
主要技術參數
1.時間設定:1(秒)-9999(秒)
2.頻率設定:10-70Hz,即振蕩300-2100次/min
3.額定功率:180W
4.夾具行程:34mm(垂直)
5.溫度設置 : -20℃或者-30℃
6.電磁鎖控制開門
7.樣品容量:隨機標配:鋁合金適配器5ml 12孔,2ml 48孔
可選配:鋁合金適配器2ml24孔
8.電源需求:220V單相交流,<2.5A
新芝生物公司簡介
寧波新芝生物科技股份有限公司(股票代碼:430685)始創于1989年,公司總部位于寧波市國家高新區,注冊資金6102萬元,是全球知名的生物樣品處理設備提供商,也是國內超聲波技術應用探索的先行者。
依托強大的科研技術實力,公司在超聲波、溫濕度、高低壓、超低溫等技術層面積累了豐厚的經驗,并先后研究開發包括生物樣品前處理儀器、分子生物學儀器、實驗室潔凈設備、冷凍干燥設備、工業防垢除垢設備、環保除藻防控設備在內的多款產品。公司始終堅持業界前沿的技術研究和應用開發,致力于為科研、教育、環保、醫療、制藥、石化、農林、材料等領域客戶提供先進的產品設備和行業解決方案。
公司目前擁有寧波、杭州兩地四大研發中心,擁有高水平研發人員數十人,專利60余項。公司曾多次承擔國家科技部、發改委、衛生部重大科研項目,是國家發改委高技術產業化示范工程中心、科學儀器產業化基地、寧波企業工程(技術)中心。公司研制的高壓氣體基因槍一舉打破國外技術壟斷,填補國內相關領域空白,榮獲浙江省科技進步二等獎。
公司高度重視品牌培育和市場開拓,為更好地服務客戶,公司在全國各地建有30余個辦事處,辦事處均配備銷售工程師和售后工程師,可隨時滿足客戶需求。全球超過15,000家實驗室在使用新芝生物的產品,各類儀器設備市場保有量超過100,000臺套,產品遠銷美、英、法、俄、日、韓等36個國家,公司年度銷售收入突破1億元人民幣,已經成為國內乃至全球知名的生物樣品制處理設備研制專家。
新芝生物30年風雨兼程,以新致心,將繼續致力于為各行業客戶提供優質的產品和貼心的服務!