實驗目的

　　為(wei)(wei)了提?貯存穩定性、降低?醇(chun)殘留量，將卡巴他賽納?脂質(zhi)體制備成(cheng)凍?注射劑，并對(dui)凍??藝進?了研究與優化。以凍?產品的外觀、主(zhu)藥含量、包封率、?分含量、?醇(chun)殘留量、貯存穩定性為(wei)(wei)評(ping)價指(zhi)標(biao)，考察了凍?保護劑 (蔗糖) ?量、料(liao)液裝(zhuang)量、預凍速度、?燥溫度對(dui)產品質(zhi)量的影響。

實驗步驟

凍干保護劑的(de)選擇(ze)及用量

　　凍?過程中會產?冰晶?破壞脂質(zhi)體結構。通(tong)常，為(wei)了保(bao)(bao)(bao)護(hu)(hu)脂質(zhi)體的(de)結構，會加?凍?保(bao)(bao)(bao)護(hu)(hu)劑(ji)(ji)，如海藻糖(tang)、蔗糖(tang)、乳糖(tang)、?露(lu)醇(chun)等。前(qian)期(qi)研(yan)究表(biao)明，?露(lu)醇(chun)作(zuo)為(wei)凍?保(bao)(bao)(bao)護(hu)(hu)劑(ji)(ji)時保(bao)(bao)(bao)護(hu)(hu)效(xiao)果(guo)較(jiao)差(cha)、粒(li)?易(yi)聚集；乳糖(tang)作(zuo)為(wei)凍?保(bao)(bao)(bao)護(hu)(hu)劑(ji)(ji)時的(de)保(bao)(bao)(bao)護(hu)(hu)效(xiao)果(guo)與蔗糖(tang)相近(jin)，但(dan)部分(fen)患者(zhe)的(de)乳糖(tang)耐受性(xing)較(jiao)差(cha)；海藻糖(tang)屬于注射級(ji)輔料，作(zuo)為(wei)凍?保(bao)(bao)(bao)護(hu)(hu)劑(ji)(ji)時保(bao)(bao)(bao)護(hu)(hu)效(xiao)果(guo)也較(jiao)好(hao)，但(dan)價格較(jiao)?。綜上所(suo)述，本研(yan)究選?蔗糖(tang)為(wei)凍?保(bao)(bao)(bao)護(hu)(hu)劑(ji)(ji)，以凍?產品(pin)的(de)外(wai)觀(guan)、?分(fen)、復溶再分(fen)散時間(t再分(fen)散，指(zhi)凍?產品(pin)完全(quan)溶解所(suo)?時間) 為(wei)評價指(zhi)標，考察蔗糖(tang)與磷脂的(de)質(zhi)量?對(dui)凍?產品(pin)質(zhi)量的(de)影響。

凍干工藝優化

　　冷凍?燥(zao)(zao)(zao)過程包括預凍和(he)?燥(zao)(zao)(zao)。為(wei)了降低能耗、提?效率，本研(yan)究從預凍階段降溫(wen)速度、?次(ci)?燥(zao)(zao)(zao)溫(wen)度、?次(ci)?燥(zao)(zao)(zao)溫(wen)度3個??對凍??藝進(jin)?研(yan)究與優化，以(yi)縮(suo)短凍?周(zhou)期。

　　2.1 預凍階段

　　預(yu)凍階段(duan)中料(liao)液的(de)(de)(de)(de)凍結程度(du)(du)或狀態(tai)會直接影響后(hou)續?燥過程的(de)(de)(de)(de)效(xiao)率和產品(pin)(pin)質(zhi)(zhi)(zhi)量，依據1納?脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)體混懸液的(de)(de)(de)(de)共晶點(dian)，將預(yu)凍溫度(du)(du)設為 –40 ℃。采?電阻(zu)法判斷(duan)樣品(pin)(pin)的(de)(de)(de)(de)凍結程度(du)(du)，考察隔板從室(shi)溫降到-40 ℃所?時間(t1)對凍?脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)體產品(pin)(pin)質(zhi)(zhi)(zhi)量的(de)(de)(de)(de)影響。

　　2.2 ?次(ci)?燥階段

　　?次?燥(zao)(zao)?稱升(sheng)華?燥(zao)(zao)，主要?的(de)(de)是(shi)除(chu)去產品中的(de)(de)?結合?。該階(jie)段(duan)的(de)(de)主要?藝參數是(shi)升(sheng)華?燥(zao)(zao)溫度和?燥(zao)(zao)時間(t升(sheng)，指(zhi)從?次?燥(zao)(zao)開始(shi)到?線完全(quan)消失及(ji)之后繼續保溫2 h的(de)(de)總時?)。依據1納?脂質體混懸液的(de)(de)共熔點，分(fen)別選(xuan)擇(ze)-15℃和-10℃作為升(sheng)華?燥(zao)(zao)溫度進?考(kao)察。設計?次?燥(zao)(zao)?案(an)如表所?，記(ji)錄?線消失時間，并對制(zhi)得(de)的(de)(de)凍?產品的(de)(de)外觀、t 再分(fen)散、?分(fen)含(han)量等指(zhi)標進?評價(jia)。

　　2.3 ?次?燥階段

　　?次(ci)?燥(zao)(zao)?稱解析?燥(zao)(zao)，主要(yao)?的是(shi)去除在?次(ci)?燥(zao)(zao)中?法去除的、未(wei)凍結(jie)(jie)的部分(fen)吸附?和(he)結(jie)(jie)合?，其?燥(zao)(zao)效果主要(yao)受?燥(zao)(zao)溫(wen)度影響(xiang)。由于實(shi)驗室?常溫(wen)度約為24℃，為了避免出箱溫(wen)度低于環境溫(wen)度?使空?中的?分(fen)凝結(jie)(jie)在產(chan)品(pin)上導致產(chan)品(pin)吸濕，將(jiang)?次(ci)?燥(zao)(zao)溫(wen)度設置(zhi)(zhi)在 24℃以(yi)上。同時，結(jie)(jie)合輔料的熱(re)穩定(ding)性，考(kao)察(cha)了?次(ci)?燥(zao)(zao)溫(wen)度分(fen)別為25℃和(he)28℃對凍?產(chan)品(pin)質(zhi)量的影響(xiang)。記(ji)錄?燥(zao)(zao)終點，并對凍?產(chan)品(pin)的外(wai)觀(guan)、t再(zai)分(fen)散、?分(fen)含量及室溫(wen) (放置(zhi)(zhi)24 h)和(he)4℃ (放置(zhi)(zhi)48 h)下穩定(ding)性 (粒徑、PDI、pH值) 進(jin)?評價。

實驗結果

凍干保(bao)護劑的選(xuan)擇及用量

表1 凍?保護劑?量(liang)對凍?納?脂(zhi)質(zhi)體質(zhi)量(liang)的(de)影(ying)響

　　可?，當(dang)m糖(tang)/m脂(zhi)=5.0或7.5時，凍?產品(pin)(pin)表?平(ping)整、?塌陷，但m糖(tang)/m脂(zhi)=7.5時，產品(pin)(pin)中?分(fen)含量(liang)較(jiao)?，約為m糖(tang)/m脂(zhi)=5.0時產品(pin)(pin)的3倍，因此，選(xuan)擇m糖(tang)/m脂(zhi)=5.0 進?后續(xu)研究。

凍干工藝優化

　　2.1 預凍階(jie)段

　　試驗結果表(biao)明，當t1=20 min 時，凍(dong)?產(chan)(chan)品(pin)(pin)的(de)(de)顆粒較(jiao)(jiao)細(xi)膩(ni) ;當t1=90 min 時，凍(dong)?產(chan)(chan)品(pin)(pin)的(de)(de)顆粒較(jiao)(jiao)粗(cu)糙;于(yu)-40℃保持(chi)3 h時，電阻值較(jiao)(jiao)?，此(ci)(ci)時1納?脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體(ti)(ti)混懸液完全凍(dong)實，繼續在-40℃保持(chi)2 h后，進?升(sheng)華?燥階段(duan)(duan)。由于(yu)粒?細(xi)膩(ni)的(de)(de)凍(dong)?脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體(ti)(ti)產(chan)(chan)品(pin)(pin)引濕(shi)性(xing)較(jiao)(jiao)強，不利于(yu)保存;并且降(jiang)溫(wen)速度(du)過(guo)快易形成較(jiao)(jiao)多(duo)粒徑(jing)較(jiao)(jiao)?的(de)(de)冰(bing)晶?損傷脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體(ti)(ti)膜(mo)，?慢速降(jiang)溫(wen)則可形成較(jiao)(jiao)?的(de)(de)冰(bing)晶，可避免破壞脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體(ti)(ti)膜(mo)。此(ci)(ci)外，縮(suo)短隔板(ban)(ban)降(jiang)溫(wen)時間對(dui)凍(dong)?機的(de)(de)性(xing)能要(yao)(yao)求較(jiao)(jiao)?，且在?燥過(guo)程中需要(yao)(yao)更多(duo)的(de)(de)能量才(cai)能達到(dao)預(yu)期的(de)(de)?燥效果，因此(ci)(ci)設(she)置 t1=90 min。 綜(zong)上所述，優化后預(yu)凍(dong)階段(duan)(duan)?藝參數為：預(yu)凍(dong)溫(wen)度(du)-40℃，t1=90 min，隔板(ban)(ban)降(jiang)溫(wen)到(dao)-40℃時，保溫(wen)時間(t2)=5 h。

　　2.2 ?次(ci)?燥(zao)階(jie)段

　　結果顯?，?案①所(suo)得凍(dong)(dong)?產(chan)品呈??花籃狀(zhuang)，表(biao)(biao)(biao)?塌陷(xian)嚴重，不符合1納?脂質體凍(dong)(dong)?粉的(de)外觀(guan)要求，且復(fu)溶性差 ;??案②所(suo)得1納?脂質體凍(dong)(dong)?粉緊貼瓶(ping)壁，呈疏松的(de)??圓柱形塊(kuai)狀(zhuang)物，表(biao)(biao)(biao)?平整(zheng)，其(qi)?線消失(shi)時間為(wei)(wei)(wei)12 h，t再分散=20 s，?分含量為(wei)(wei)(wei)1.0%，貯(zhu)存穩定性良好，且包(bao)封率(lv)較? (表(biao)(biao)(biao)3)。因此本研究將升華(hua)?燥溫度設為(wei)(wei)(wei)-15℃，t升設為(wei)(wei)(wei)14 h。

表2 ?次?燥的凍?參數設(she)計

表3 ?案②制備的(de)(de)凍?注射(she)劑的(de)(de)貯存穩定(ding)性及包封(feng)率

　　2.3 ?次?燥階(jie)段

　　結果如表(biao)4所(suo)(suo)?，?次(ci)?燥(zao)(zao)溫度(du)為25或28℃時，所(suo)(suo)得凍(dong)?產(chan)品(pin)的外觀均(jun)(jun)為緊貼瓶壁的??圓(yuan)柱(zhu)形疏松(song)塊狀物，表(biao)?平整(zheng)、?塌陷，且(qie)t再分散均(jun)(jun)為20 s，?分含量均(jun)(jun)低于2%，其他各項評價(jia)指標(biao)均(jun)(jun)相近(jin)且(qie)表(biao)現(xian)良好。?次(ci)?燥(zao)(zao)溫度(du)為25和(he)28℃時，到達?燥(zao)(zao)終點所(suo)(suo)需(xu)時間(jian)分別為61.50和(he)48.83 h，t解分別為40.67和(he)28.00 h。為了(le)節約時間(jian)、減少能(neng)耗，本研究將解析?燥(zao)(zao)溫度(du)設為28℃，解析?燥(zao)(zao)時間(jian)設為28 h，凍(dong)?全程總耗時為48.83 h。

表4 ?次?燥溫度對凍(dong)?納?脂質體(ti)質量的影響

優化的凍干工藝

　　綜上所述，優化凍(dong)??藝為：蔗糖與(yu)磷脂的質量?為5.0；脂質體中卡(ka)巴他賽質量濃度(du)為2mg/mL，規格為每瓶20mg；?林瓶選?20或30mL的規格，當(dang)?林瓶規格為20mL時(shi)(shi)(shi)，料液與(yu)?林瓶體積(ji)?為1∶2，當(dang)?林瓶規格為30mL時(shi)(shi)(shi)，料液與(yu)?林瓶體積(ji)?為1：3；采(cai)?階段式升溫(wen)，凍(dong)?曲線(xian)如圖1所?，預(yu)凍(dong)溫(wen)度(du)為-40℃，隔板(ban)降溫(wen)時(shi)(shi)(shi)間為 90 min，-40℃時(shi)(shi)(shi)保溫(wen)5h；?次?燥(zao)溫(wen)為-15℃，?次?燥(zao)時(shi)(shi)(shi)間為14h；?次?燥(zao)溫(wen)度(du)為28 ℃，?次?燥(zao)時(shi)(shi)(shi)間為28h。